貨號
產(chǎn)品規(guī)格
售價(jià)
備注
BN25012-100ml
100ml
¥160.00
BN25012-500mL
500mL
¥600.00
BN25012-500ml
500ml
¥600.00
產(chǎn)品描述
規(guī)格:裂解液100ml,PMSF 1.5ml 本產(chǎn)品配有 PMSF(100mM)
保存:RIPA 裂解液 4℃保存,PMSF -20℃保存。
規(guī)格:裂解液100ml,PMSF 1ml 本產(chǎn)品配有 PMSF(100mM)
保存:RIPA 裂解液 4℃保存,PMSF -20℃保存
產(chǎn)品簡介:RIPA組織/細(xì)胞裂解液是利用表面活性劑等來裂解細(xì)胞膜(包括核膜)。本試劑提取的蛋白為可溶性
總蛋白.
使用說明:
如發(fā)現(xiàn)RIPA有沉淀,請放室溫半小時(shí)或者常溫水浴使沉淀溶解。
根據(jù)使用量,取每Iml RIPA加入10ul PMSF,使PMSF的最終濃度為1mM,混勻備用(PMSF現(xiàn)用現(xiàn)加).
1、樣品前處理:
a)對于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250
u裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。
b)對于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液,用手指輕
彈懸浮細(xì)胞以充分裂解。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成5-10x10細(xì)胞管,然
后再裂解.
c)對于組織樣品:把組織剪切成細(xì)小的碎片。按照每20mg組織加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液(如果
裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量).用玻璃勻
漿器勻漿,直至充分裂解。
2、后處理:
將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Westem
blotting 和免疫沉淀等操作。
注意事項(xiàng):
1、使用本裂解液可以裂解細(xì)胞核,釋放出核蛋白的同時(shí),也會(huì)將基因組一并釋放出來,造成細(xì)胞裂解液粘稠.
此時(shí)可以直接加入蛋白上樣緩沖液煮沸再離心,離心后直接上樣電泳;若想測定濃度,可入加少量SDS(1%),
煮沸后離心測濃度。
2、本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑,所以不適合使用Bradford蛋白濃度測定試劑盒,請選擇
BCA法或者Lowry法檢測蛋白濃度。
3、如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散粘稠狀物,隨后離心取上清用于
后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
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