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BN13005-1 mg
1 mg
¥1400.00
產品描述
產品規格:1 mg、50 μL(2 mM)
產品參數
外觀:可溶于DMSO的橙紅色固體(F3005)
貯存條件:-20℃ 避光保存
保質期:見外包裝
CAS號:121714-22-5
分子式:C51H50Cll2N2O23
分子量:1129.9
分子結構圖:
產品介紹
Fluo-3, AM ester是一種可以穿透細胞膜的熒光染料。 Fluo-3, AM ester 進入細胞后可以被細胞內源性酯酶剪切形成Fluo-3,從而被滯留在細胞內。Fluo-3可以和鈣離子結合,結合鈣離子后可以產生較強的熒光,最大激發波長為506 nm, 最大發射波長為526 nm。
實驗步驟
1. 用無水DMSO溶解 Fluo-3, AM配制成2 - 5 mM的儲存液, 或將溶液形式的Fluo-3, AM儲存液取出于室溫回溫。
2. 用PBS或HBSS等緩沖液稀釋Fluo-3, AM 溶液,制備4 μM 的Fluo-3, AM 工作液。
注:為了避免過度加載造成細胞毒性,建議在取得有效結果的基礎上盡量使用最低探針濃度。
3.(可選)如果Fluo-3進入細胞的效果不好,可向Fluo-3, AM/DMSO 溶液中加入適量20% Pluronic F127溶液,防止 Fluo-3, AM在緩沖液中聚合并促進其進入細胞,Pluronic F127終濃度控制在0.04-0.05%。
注:(1) 20%(w/v)的Pluronic F-127 DMSO母液配制:100 mg Pluronic F-127中加入0.5 mL DMSO,配制成20% (w/v) 的 DMSO 母液。溶解過程需要在40 - 50℃加熱20 - 30 min。 溶液室溫保存,不要冷藏。如果有結晶析出,可以重新加熱后溶解,不影響使用。
(2) Pluronic F127可降低Fluo-3, AM的穩定性,因此只建議在配制工作液時加入,不建議將其加入儲存液長期保存。
4. 取出預培養的細胞,除去培養基,使用PBS或HBSS溶液洗滌細胞3次。
5. 將Fluo-3, AM 工作液加入細胞,在37℃培養10-60 min。
注:如果首次實驗不能確定孵育溫度和時間,建議先嘗試37℃孵育20分鐘,觀察熒光效果。如果細胞死亡較多,則適當縮短時間或降低溫度;如果熒光強度太弱,則適當延長時間。
6. 去除Fluo-3, AM 工作液,用PBS或HBSS等緩沖液洗滌細胞3次,然后用PBS或HBSS等緩沖液重懸細胞,制成1×105 cells/mL的溶液。
7. 37℃下培養10 min,以確保 AM 體在細胞內的完全去酯化作用。
8. 進行熒光鈣離子檢測(激發波長506 nm,發射波長526 nm )。
注意事項
1. 如果使用含有血清的培養基,血清中的酯酶會分解AM 體,從而降低Fluo-3, AM 進入細胞的效果。另外,含有酚紅的培養基會使本底值略微偏高,所以加工作液之前,應盡量去除培養基殘留。
2. 熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。
3. 本Fluo-3, AM容易吸潮,從冰箱取出后,請確認在干燥的環境放至室溫后再開封。由于試劑極微量,開封前請將其短暫離心,以保證粉末落入管底。
4. Fluo-3, AM遇水極易分解,如果不能一次用完,建議將儲液小量分裝保存。