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BN16002-50T
50T
¥1060.00
BN16002-100T
100T
¥1600.00
產品描述
產品規格:50T,100T
產品內容:
儲存條件 4℃避光冷藏,請勿凍存。有效期見外包裝。
光譜特性
YF488-Annexin V: Abs/Em =490/515 nm
PI: Abs/Em = 535/617 nm (with DNA)
產品介紹
YF488-Annexin V 和 PI 凋亡試劑盒提供了一種快速 簡便的方法,通過標記早期凋亡細胞(綠色)和壞死細胞(紅 色),用于檢測細胞凋亡水平。產品可以使用流式細胞儀或其它熒光檢測設備進行檢測。
YF488-Annexin V 可以標記凋亡細胞。Annexin V 選擇 性結合磷酯酰絲氨酸(phosphatidylserine,簡稱 PS)。在細胞 發生早期凋亡時,PS 會外翻到細胞表面,即細胞膜外側。用綠色熒光探針 YF488 標記的 Annexin V,即 YF488 -Annexin V,可以結合外翻的磷酯酰絲氨酸,從而檢測細胞凋亡的重要特征。我們公司的 YF488 染料與熒光素/FITC 相比,熒光亮度更高,且不受環境中 pH 的影響,具有良 好的光穩定性。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一種 DNA 結合染 料,它可以染色壞死細胞或凋亡晚期喪失細胞膜完整性的細胞的細胞核。PI 可以由 488, 532 或 546 nm 的激光激發, 呈現紅色熒光。
使用方法
下列實驗方案以利用星形孢菌素誘導 Jurkat 細胞凋亡 為例, 如果使用其他誘導劑和其他類型的細胞,實驗條件 需要略作調整。
一、流式細胞檢測
1. 根據實驗要求誘導細胞凋亡。檢測樣品中應包含未經處 理的細胞樣品,作為陰性對照。此外,設定一組樣品做單染, 用于調節補償。
2. 收集細胞。懸浮細胞:300 g,4℃離心 5 min 收集細胞; 貼壁細胞:用不含 EDTA 的胰酶消化后 300 g,4℃離心 5 min收集細胞,胰酶消化時間不宜過長,以防引起假陽性。
注:用胰蛋白酶消化然后使細胞在最佳細胞培養條件和培養 基中恢復約30分鐘,然后再染色。 胰蛋白酶消化會暫時破 壞質膜,允許Annexin V結合磷脂酰絲氨酸在細胞膜的細胞 質表面上,從而導致假陽性染色。
3. 用預冷的PBS 洗滌細胞兩次,每次均在 300 g,4℃下離 心 5 min,收集 1-5×105 個細胞并用100 μL 1×結合緩沖液 重懸細胞。
4. 每管加入 4-5 μL 的YF488 -Annexin V 和 5 μL 的 PI工 作液。
注:我們推薦準備兩管額外的流式管,每管中只加入一種單染 染料(YF488-Annexin V 和PI),用于流式單染的補償調 節。
5. 室溫避光孵育 10-15 min,為避免細胞凋亡進程,孵育過程可在冰上操作。
6. 每管加入 400 μL 的 PBS 或 1×結合緩沖液,盡快通過 流式細胞儀檢測細胞凋亡情況。YF488-Annexin V 由 488 nm 激光激發,檢測熒光發射光譜在530 nm 處(FITC 通道), PI 通道發射光譜約在 617 nm 處(注:PBS 或 1×結合 緩沖液的選擇根據不同凋亡處理以及不同細胞具體選擇)。
二、熒光顯微鏡檢測
對于懸浮細胞,可參照流式細胞檢測的方法進行具體操作。
1. 在蓋玻片或載玻片小室中接種細胞。
2. 根據實驗要求誘導細胞凋亡。檢測樣品中應包含未經處理的細胞樣品,作為陰性對照。
3. 用PBS 洗滌細胞。
注:細胞收集后如果不用 PBS 清洗,可以用含血清的培養基直接替代Annexin V 結合緩沖液,但是 Annexin V 的使用濃度需要重新優化。
4. 每 100 μL 的 1× Annexin V 結合緩沖液中加入 5-25 μL的YF488 -Annexin V 和 5 μL 的PI。
注:最佳使用濃度由具體實驗要求確定。
5. 向培養板中加入足量的染液以覆蓋全部細胞,室溫避光孵育 15-30 min。為避免細胞凋亡進程,孵育過程可在冰上操作,但孵育時間至少延長至 30 min。
6. 用 1×結合緩沖液清洗細胞。
7. 將孵育有細胞的蓋玻片置于載玻片上,載玻片可提前加 一滴 1×結合緩沖液;對于培養在小室內的細胞,可直接加入足量的 1×結合緩沖液覆蓋細胞。
8. 使用合適的濾光片觀察細胞。YF488 -Annexin V 可用 FITC 適用的濾光片,PI 可用 Cy3 或者 Texas。
注意事項: 熒光染料均存在淬滅問題,保存和使用過程中請盡量注 意避光,以減緩熒光淬滅。