親和層析是一種通過分子間的特異性識別和相互作用來分離純化物質的層析方法。如酶與底物、抗原和抗體之間專一的相互作用等。將其一作為配基固定在填料上,就可以從初始樣品中吸附相應的生物分子,然后通過合適的洗脫將其解離達到純化的目的。
技術優勢 親和層析具有高選擇性、高分辨率、高結合載量的優點,經常可以一步純化達到>90%的純度,能夠完成一般方法很難完成的分離。 實驗步驟 ●首先,選擇合適的緩沖液平衡層析柱,以保證目標分子與配體的結合效率在最佳范圍內。 ●上樣時,目標分子多數結合在配體上,由于混合樣品中的雜質不能與配基有效的結合而流穿下來。 ●上樣完成后,層析柱上通常含有非特異性吸附的雜質分子,需要先將這些雜質洗脫。 ●雜質取出后,再利用洗脫液將目標分子從配體上洗脫下來。 ●親和層析的洗脫類型分為非競爭性洗脫(改變緩沖液的組成,如離子強度,改變pH等)和競爭性洗脫(目標分子類似物和配體類似物等)。 應用方向 ●親和層析具有高選擇性、高分辨率、高結合載量的優點,經常可以一步純化達到>90%的純度,能夠完成一般方法很難完成的分離。 親和層析填料命名規則 配基+基架類型+基球特性 配基的不同,對應應用場景也不相同。 鎳-:分離帶His標簽的重組蛋白及能被金屬離子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白。 鎳NTA瓊脂糖凝膠FF:具特異性好流速快,螯合鎳更穩定,能耐受更高的還原劑,物理和化學穩定性好,批次重復性好。已經螯合好鎳離子,使用更方便,由于顆粒粒度均勻,粒徑小,所以分離效果更好,可完全代替進口產品。 藍色&紅色:親和層析介質,純化干擾素、α2-巨球蛋白、凝血因子、需要核苷酸輔助的酶 肝素:肝素能和抗凝血因子Ⅲ、凝血因子、蛋白合成因子、脂蛋白、干擾素、核酸結合蛋白、限制內切酶、凝血酶及類凝血酶等生物大分子結合,所以肝素瓊脂糖凝膠可以用于這類物質的純化。 谷胱甘肽:親和層析介質,純化羧端含谷胱甘肽 S-轉移酶重組融合蛋白或依賴 S-轉移酶或谷胱甘肽的蛋白。 胰蛋白酶:親和層析介質,純化胰蛋白酶抑制劑、抑肽酶。 苯甲脒:純化胰蛋白酶、凝血酶、尿激酶、激肽釋放酶、前激肽釋放酶等絲氨酸蛋白酶。 ConA:純化糖蛋白、膜蛋白、糖脂、多糖、帶甘露糖苷或葡萄糖苷殘基的膜囊泡,激素,脂蛋白等。 賴氨酸:純化血纖維蛋白溶酶原等。 羧基:純化含有氨基配體的物質等。 明膠:純化或去除血纖維結合蛋白等。 精氨酸:前激肽釋放酶,纖溶酶原激活物,凝血酶原和成熟促進因子等。
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