01
pH檢測染料
PH是“potential Hydrogen”的縮寫,其計算方法;pH = -1g[H+] ,它是表示溶液中H+的濃度指標,反映溶液的酸堿性強弱。pH 值是人們通常用來衡量人體體液的酸堿度,pH值是溶液中親離子濃度指數的數值,一般在 0~14 之間,當 pH=7 時溶液為中性,pH<7 時為酸性,值越小酸性越強,pH>7 時為堿性,值越大,堿性越強.
人體在正常生理狀態下,血液的pH值精確保持在 7.35~7.45 之間,為弱堿性,這個 pH 值是人體細胞完成生理功能的最佳酸堿度,少一分或多一分都不行,人體酸堿平衡非常重要,如果低于7.45會發生酸中毒,pH 值下降 0.2,機體的輸氧量就會減少 69.4% 造成整個機體組織缺氧。高于 7.45 會堿中毒,如果嚴重會有生命危險。
人體的一切生命活動都需要酶的催化,(酶使人體所進食的食物得到消化和吸收,并且維持內臟所有功能,包括:細胞修復,消炎排毒,新陳代謝,提高免疫力,產生能量,而pH值對酶的活性有重要的影響。人體各部分要保持生理與結構的穩定,就必須保持穩定的 pH 值。
BCECF, AM 是一種可以穿透細胞膜檢測細胞內pH的熒 光染料。BCECF, AM沒有熒光,進入細胞后可以被細胞內的 酯酶剪切形成BCECF,從而被滯留在細胞內。BCECF在適當 的pH值條件下可以被激發形成綠色熒光。最大激發波長和 發射波長因pH的不同而有所不同,最大激發波長在503 nm 左右,最大發射波長在520 nm左右,實際檢測時推薦使用的 激發波長為488 nm,發射波長為535 nm。
BCECF, AM 不僅被廣泛用于哺乳動物細胞的研究,也用于動物組織、植物細胞、細菌和酵母等的體內 pH 水平檢 測。此外,在細胞內有pH變化的細胞毒性、細胞凋亡、細胞粘附、藥物抵抗、細胞趨化等過程中 BCECF, AM 也被廣泛應用。
活性氧
活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)是機體進行正常有氧代謝的產物,是由氧組成,含氧并且性質活潑的一類物質的總稱。包含超氧陰離子(O2-)、過氧化氫(H2O2)、羥自由基(OH-)、臭氧(O3)和單線態氧(1O2)等,由于它們含有不成對的電子,因此具有很高的化學反應活性。
H2DCFDA 是活性氧族的細胞滲透性指示劑,可在細胞內的酯酶發生氧化反應去除其乙酸基團之前保持非熒光性。在氧化環境中,H2DCFDA 轉變成發出綠色熒光的 2,7-二氯二氫熒光素。
Dihydroethidium(Hydroethidine)是常用的 DNA 染料溴化乙錠的還原形式,它可以檢測活細胞內的氧化活性,也可以檢測吞噬細胞的“呼吸爆發”。Dihydroethidium 本身在細胞中具有藍色熒光(Ex/Em:355/420 nm),當它進入細胞中,脫氫后會成為氧化形式的乙錠,當與 DNA 嵌合時,氧化形式的乙錠會發出紅色熒光(Ex/Em:518/605 nm)。
二氫乙錠(Dihydroethidium, DHE),可自由透過活細胞進入細胞內,并被細胞內的ROS氧化,形成氧化乙錠;氧化乙錠可摻入染色體DNA中,產生紅色熒光。根據活細胞中紅色熒光的產生,可以判斷細胞ROS含量的多少和變化。二氫乙錠在細胞內主要被超氧陰離子型ROS氧化,用流式細胞儀或熒光顯微鏡可直接觀察,是一種快速簡便的組織或培養活細胞中ROS經典檢測方法。
DCFH-DA(二氯二氫熒光素-乙酰乙酸酯)本身無熒光,可自由透過活細胞膜進入細胞內,并被細胞內的酯酶水解,形成 DCFH,DCFH 無熒光且不能通透細胞膜,從而被細胞內的活性氧氧化生成有熒光的 DCF。根據活細胞中熒光的產生,可以判斷細胞活性氧的含量和變化。用流式細胞儀或熒光顯微鏡可直接觀察,是一種經典的組織或活細胞中活性氧檢測方法。
NO
許多生物分子都具有復雜的結構,但一氧化氮只包含兩個原子——一個氮原子和一個氧原子,雖然一氧化氮是這樣簡單的分子,但在我們身體內產生巨大的影響,具有許多重要的生物學功能。
一氧化氮檢測試劑盒(Nitric Oxide Assay Kit)是一種靈敏簡單的檢測一氧化氮的試劑盒。生物機體內有三種一氧化氮合酶(Nitric Oxide Synthase, NOS)。一氧化氮合酶催化 L-精氨酸產生一氧化氮,發揮復雜的生理功能。一氧化氮產生之后,會被迅速代謝為硝酸鹽和亞硝酸鹽,本試劑盒利用經典的 Griess 試劑對亞硝酸鹽 進行定量測定來間接測定細胞釋放的一氧化氮。本試劑盒以亞硝酸鈉為標準品,檢測線性范圍為 3.12-200 μM,靈敏度≤3.12 μM。本試劑盒能夠檢測動物細胞培養上清和血漿中的一氧化氮。
04
代謝小分子物質
煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide, NAD)是所有細胞中都存在的一種輔酶,包括NAD+(氧化型)和NADH(還原型)兩種形式。NAD+既是氧化還原反應過程中傳遞電子的輔酶,又可以作為很多酶的底物來參與細胞內反應。
煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate, NADP)是很多氧化還原反應的輔酶,包括NADP+(氧化型)和NADPH(還原型)兩種形式。NADP+也參與到生物合成反應中,比如脂質和核酸的合成。傳統的NAD+/NADH和NADP+/NADPH測定是通過檢測340 nm處的吸收來完成的,該方法靈敏度低且易受干擾。
NAD/NADH、NADP/NADPH檢測試劑盒都是基于WST-8的顯色反應,通過比色法來檢測細胞、組織或其它樣品中NAD+(氧化型輔酶Ⅰ)和NADH(還原型輔酶Ⅰ)、NADP+(氧化型輔酶Ⅱ)和NADPH(還原型輔酶Ⅱ)各自的量、比值和總量的檢測試劑盒。試劑盒的特異性強。在反應過程中NAD+被還原為NADH,NADH將WST-8還原成橙黃色formazan(甲臜),在450 nm左右有最大吸收峰/在反應過程中NADP+被還原為NADPH,NADPH將WST-8還原成橙黃色formazan(甲臜),在450 nm左右有最大吸收峰。靈敏度高可檢測0.1 μM-10 μM NAD+或NADH/ NADP+或NADPH。
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