質譜級賴氨酰肽鏈內切酶
Lysyl Endopeptidase?
本產品是質譜分析前處理時常用的蛋白分解酶即賴氨酰肽鏈內切酶,該酶可以特異性切除賴氨酸基團C末端的多肽,可用于蛋白測序分析和 Lys-X 化合物的酶合成。若同時使用賴氨酰肽鏈內切酶和胰酶,可更好地切斷賴氨酸基團的多肽,增加多肽的數量。產品已按照使用習慣做成小包裝,是方便使用的冷凍干燥品。20 μg/支可用于100-200個樣品的凝膠內消化。
來源:細菌
外觀:凍干粉(包含2 mmol/L Tris-HCl 緩沖液,pH8)
活性:0.03~0.07 AU/vial
分子量:27,000(瓊脂糖過濾),30,000(SDS-PAGE)
溶解性:溶于水或緩沖液
穩定性:溶解于 pH 值 5.0-12.0 的 Tris 緩沖液中,可在4℃穩定保存2年;在 pH 值 6.0-11.0、30℃時能穩定保存,但溫度超過50℃時不穩定。
最適pH值:9.0~9.5
等電點:6.9~7.0
底物特異性:
可水解底物——Tos-Lys-OMe、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA
不可水解底物——Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNA、Arg-pNA
抑制劑:DFP、PMSF、TLCK
◆特點
● 高特異性、高蛋白質消化率、適用于蛋白質譜分析
● 提高裂解效率、增加肽段數量
● 根據使用量特意制備小包裝,方便使用
◆應用
分別采用胰蛋白酶(Tp)、賴氨酰肽鏈內切酶(Lys-C)和 Tp與Lys-C 聯用進行膠內酶切的效果比較。
牛血清蛋白 BSA 的條帶(100 ng)通過 SDS-PAGE 獲得,然后分別用 Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 進行酶切,再用 MALDI-TOFMS 法進行分析。
這些蛋白酶的實驗效果見下表。
表 1:Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 的結果對照
這些結果表明 Lys-C 酶解的漏切位點數(Missed Cleavage)最少。Tp 酶解時加入 Lys-C 后,漏切位點數有所降低,同時,可以鑒定出更多的多肽。
Tp | Lys-C | Lys-C+Tp | |
裂解位點 | 精氨酸和賴氨酸的C端 | 賴氨酸的C端 | 精氨酸和賴氨酸的C端 |
漏切位點數 (漏切位點所占比例) | 多(8%) | 很少(0%) | 少(3%) |
鑒定出的多肽數量 | 17 | 19 | 22 |
胰蛋白酶(Tp)(圖 a)和賴氨酰肽鏈內切酶(Lys-C)+Tp( 圖 b)酶切后的質譜結果對照圖。
Lys-C+Tp 酶切后,可以在 m/z=2000 時得到吸收峰,而單獨的 Tp 酶切在 m/z=2000 時沒有吸收峰。該結果表明 Lys-C 可以提高測序覆蓋度。
( 數據由大阪醫療中心和婦嬰健康研究所Y. Wada 博士提供 )
賴氨酰肽鏈內切酶
賴氨酰肽鏈內切酶,最初由 Masaki 等人從土壤細菌中分離得到。該酶可以特異性剪切賴氨酸殘基C末端和S-氨乙基半胱氨酸殘基的肽鍵,用于蛋白測序和 Lys-X 化合物的酶催化合成。該酶穩定性高,在4M尿素或 0.1% SDS 溶液中 30℃ 孵育6小時之后,仍然擁有完整的生物活性。
外觀 | 凍干粉(包含ca. 10% Tris-HCl buffer,pH 8) | 活性 | 見包裝 |
分子量 | 27,000(凝膠過濾);30,000 (SDS-PAGE) | 溶解性 | 易溶于水或緩沖液 |
最佳pH | 9.0-9.5(酰胺酶的最佳活性 pH) | 等電點 | 6.9-7.0 |
抑制劑 | DFP、PMSF、TLCK | 來源 | 細菌 |
穩定性 | 溶于pH 值 5.0-12.0 的緩沖液中,可于4℃穩定保存。溶于pH 值 6.0-11.0 的緩沖液中,可于30℃穩 定保存,但是50℃及以上不穩定。 | ||
單位定義 | 一單位酰胺酶(AU)指在30℃ pH 9.5 時每分鐘產生1 μmol 對硝基苯胺所需的酶量。 | ||
底物特異性 | 水解底物:Tos-Lys-Ome、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA | ||
非水解底物:Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA |
※ 本頁面產品僅供研究用,研究以外不可使用。
產品列表
產品編號 | 產品名稱 | 產品規格 | 產品等級 | 備注 |
125-05061 | Lysyl Endopeptidase?, MS Grade 賴氨酰肽鏈內切酶,MS級 | 20 μg×5 | 質譜級 | - |
050-05941 | Endoproteinaseglu C, Sequencinggrade 測序級谷氨酰蛋白內切酶Glu-C | 50 μg | 生物化學分析級 | - |
202-15951 | Trypsin, from Porcine Pancreas, Mass Spectrometrygrade 豬胰腺胰蛋白酶質譜級別 | 20 μg×5 | 質譜級 | - |