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FUJIFILM wako | NK 細胞抑制劑 Anti Asialo GM1(Anti AsGM1)

NK細胞抑制劑

Anti Asialo GM1(Anti AsGM1)

糖脂神經節苷脂GM1(ASGM1)在感染病毒時的T細胞及自然殺傷(NK)細胞中表達。ASGM1局部存在于NK和CD8(+)細胞的脂筏結構中，抗Asialo- GM1抗體可降低在各種小鼠、大鼠中的NK細胞活性。

接種抗Asialo-GM1抗體至實驗動物，去除NK細胞，用于NK細胞的功能分析或移植其他物種來源的腫瘤組織至小鼠體內^1）2）。

ASGM1也在嗜堿性細胞中表達，有報告稱，抗Asia-GM1抗體也可用于去除嗜堿性細胞^3）。

■ 參考文獻

1）	Kasai M., Iwamori M., Nagai Y., Okumura K., and Tada T. : J. Immunol., 10, 175 (1980).
2）	Habu S., Fukui H., Shimamura M., Kasai M., Nagai Y., Okumura K., and Tamaoki N. : J. Immunol., 127, 34 (1981).
3）	Hideto, N., Kaori, M., Yohei, K., Yoshiyuki, M., and Hajime K., .: J. Immunol., 186, 10, 5766(2011)

◆原理介紹

　　 Anti Asialo-GM1（Rabbit）抗血清可以減少大鼠或者小鼠來源的自然殺傷細胞（NK 細胞）的活性。該抗體可以與 NK 細胞發生特異性結合，從而抑制 NK 細胞非特異性殺傷靶細胞的活性。NK 細胞是一種免疫監視細胞，其靶細胞包括腫瘤細胞、同種異體移植的器官、組織等。可運用于藥物篩選，器官移植，自身免疫疾病等研究。

　　每個產品有具體的體內外的滴定數據。

◆特點

●　已經體內NK細胞活性驗證

●　眾多文獻應用案例

特性	抗Asialo-GM1抗體、凍干品
免疫方法	牛腦組織純化的Asialo-GM1甲基化BSA（bovine serum albumin），與FCA（Freund’s complete adjuvant）　同時對兔免疫。
純化方法	50％硫酸銨鹽化后，使用含有磷酸緩沖液(pH=7.2)的生理鹽水透析。
特異性	與小鼠、大鼠的NK細胞以及小鼠胚胎胸腺細胞反應。
復溶	請在1 mL蒸餾水中復溶。建議使用磷酸緩沖液（pH 7.2）進行稀釋。
接種方法	一只小鼠靜脈注射10~50 μL。

◆注射方法

小鼠-靜脈注射：

10-50 μL（推薦 20 μL）具體劑量由滴度和規格而定。第一次注射在４天內有效，因此兩周內需要注射３-４次。

大鼠-靜脈注射：

50-250 μL（小鼠劑量的４或５倍）具體劑量還須考慮大鼠的健康狀況、體重和 NK 活性。

小鼠和大鼠-腹腔給藥：

同等劑量或多于靜脈注射。

◆產品信息

制備：	從牛腦組織里提純的 Asialo-GM1 與甲基化牛血清白蛋白和弗氏完全佐劑一起使用，可進行反復免疫。用含有磷酸緩沖鹽水（ph7.2）的 50% 硫酸銨透析后，得到血清里的丙種球蛋白（Gammaglobulin）片段。
內容：	含有唾液酸抗體 GM1 的兔血清 50% 硫酸銨鹽析分層物（含蛋白量約 10 mg/mL）。
提純法：	50% 的硫酸銨鹽析后，用含有磷酸緩沖液的生理鹽水透析，然后凍干。
特異性：	作用于小鼠和大鼠的自然殺傷細胞；小鼠單核細胞（是一種不含自然殺傷細胞、骨髓、胎兒肝細胞和裸鼠脾臟巨噬細胞的肝細胞）；小鼠胎兒胸腺細胞（12日齡；生存率不斷降低直到沒有出現新生小鼠）（備注：如果濃度高，也能作用于成熟的T淋巴細胞）
免疫球蛋白類型：	IgG、IgA 和 IgM
重組：	建議用蒸餾水（1 mL）。由于該產品是使用鹽來進行凍干的，如果用其它溶劑如 PBS 或 MEM，就能增加其鹽濃度。
抗體滴度：	通過免疫凝聚實驗得出結果，抗體滴度比例約 1 : 1,000
保存方法：	存儲在２~10℃下
包裝規格：	１mL樣瓶
形狀：	干凍品

欲了解詳情請看相關資料

◆應用案例

適用的動物模型	運用
腫瘤動物模型	與抗腫瘤藥物混合后注入腫瘤動物模型內，研究抗腫瘤藥物的作用機理。
肝纖維化動物模型	與治療肝纖維化的藥物混合后注入動物模型體內，研究抗肝纖維化藥物的作用機理。
器官移植動物模型	器官移植后，會產生免疫排斥反應，機體內的免疫監視會清除”異己“的細胞和器官。可用于研究器官移植后使用的免疫抑制劑的作用機理
自身免疫疾病動物模型	研究治療自身免疫疾病藥物的作用機理。
干細胞動物模型	抑制 NK 細胞的活性，從而有利于干細胞動物模型的建立。
糖尿病動物模型	研究炎癥與糖尿病的關系。

◆抗Asialo-GM1抗體體外活性

向抗Asialo-GM1抗體中添加豚鼠來源補體，并在BALB/c小鼠的胰腺細胞中進行處理。通過靶向YAC-1細胞(●)體外檢測NK活性。

效應子/靶標的比率為50：1，○表示補體處理后BALB/c小鼠胰腺細胞的NK活性。

※ BALB/c小鼠經聚(I:C)鈉鹽100 μg（0.2 mL的500 μg/ mL）處理后，正常飼養18小時后開始下一步操作。

◆抗Asialo GM1抗體體內活性

向BALB/c小鼠腹腔內注射抗Asialo-GM1抗體，并檢測單次給藥（效應子/靶標= 50：1）3天后收集的胰腺細胞對YAC-1細胞的腫瘤溶解度。

※ BALB/c小鼠經聚(I:C)鈉鹽100 μg（0.2 mL的500 μg/ mL）處理后，正常飼養18小時后開始下一步操作。

■ 對照：正常兔血清

腹腔注射量	腫瘤溶解度（%）
100 μL	70.8

■ 抗Asialo-GM1抗體

腹腔注射量	腫瘤溶解度（%）
10 μL	7
25 μL	8.4
50 μL	2
100 μL	0

※ 本頁面產品僅供研究用，研究以外不可使用。

產品編號	產品名稱	產品規格	產品等級
014-09801(986-10001)	Anti asialo GM1 (Rabbit) NK細胞抑制劑	1 mL	for Immunochemistry

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了解應用案例

Anti Asialo GM1的抗血清可以與NK細胞（自然殺傷細胞）結合，抑制NK細胞非特異性殺傷靶細胞的活性。靶細胞包括腫瘤細胞，同種異體移植的器官、組織等。可用于藥物篩選、器官移植、自身免疫疾病研究等。NK細胞屬于天然免疫細胞，具有免疫監視功能。

　　特異性：小鼠、大鼠的NK細胞，小鼠單核細胞（不含有NK細胞的肝臟細胞，骨髓，胎兒肝臟細胞，裸鼠巨噬細胞的脾細胞），胎兒T淋巴細胞（12天）。

◆研究糖尿病的免疫治療

　　據報道，抗細胞凋亡細胞因子IL-15具有促進NK細胞和T細胞（包括調節性T細胞，Tregs）存活和激活上述兩種細胞活性的功能。在患有糖尿病的NOD小鼠體內反復注射IL-15。如果每天一次，注射2周，既不抑制也不加速未處理NOD小鼠患糖尿病的情況。但是NK細胞活性喪失的NOD小鼠注射IL-15可以明顯減少糖尿病的發病率和延遲糖尿病發病時間，但是NK細胞活性喪失不注射IL-15的小鼠依然病發糖尿病。在用IL-15處理，NK細胞活性喪失的NOD小鼠體內產生的保護效應與CD4⁺CD25⁺ Tregs免疫抑制活性增加有關。在該項實驗中，用Anti AsGM1注射小鼠，抑制NK細胞活性，導致NOD小鼠NK細胞活性缺失。

參考文獻：Jinxing Xia et al., Clinica l Immunology.(2010) 134, 130–139 <全文>

◆研究敗血癥中NK細胞的功能

　　NK細胞和NKT細胞都屬于天然免疫系統，但在細菌引起的敗血癥中這兩種細胞的作用是有爭議。用Anti Asialo GM1處理小鼠，成為NK細胞活性抑制的小鼠；用CD1d單抗處理小鼠，成為NKT細胞活性抑制的小鼠；同時用同型對照單抗處理小鼠，作為陰性對照。之后這些小鼠感染肺炎鏈球菌。分析血清和組織樣品中細菌的含量，細胞因子，脾細胞凋亡率、用流式鑒定細胞，同時也分析脾細胞miRNA的表達。結果發現NK細胞活性抑制的小鼠延長了存活率。一旦NKT細胞激活抑制，與其他細胞群相比，脾臟的NK (CD3?/NK1.1+)細胞數目增加。NKT細胞活性抑制導致小鼠體內的細菌含量升高，導致血清和脾細胞IFN-γ水平升高。抗CD1d處理小鼠的脾細胞miRNA分析顯示miR-200C和miR-29a下調，miR-125a-5p上調。這些變化發生在NK細胞活性抑制后。NK細胞可能與肺炎球菌肺炎的死亡率有關。抑制NKT細胞的激活導致(CD3?/NK1.1+)細胞數目增加，IFN-γ水平升高，改變脾細胞miRNA表達。

參考文獻：Eirini Christaki et al., Journal of Immunology Research, Volume 2015 (2015),Article

　　　　　ID 532717, 10 pages <全文>

◆研究自身免疫性疾病的NK細胞功能

　　NK細胞是先天免疫淋巴細胞，在先天免疫和適應性免疫中均起著關鍵性作用。它在小鼠體內通過NK細胞消耗 Abs，特別是抗唾液酸GM1 (ASGM1)，起關鍵作用。此次研究中，我們通過整個嗜堿性粒細胞群體組成如表達NK細胞群一樣，來表達ASGM1以及CD49b（DX5），并通過抗ASGM1在體內通過嗜堿性粒細胞消耗的抗FcεRIαAb有效地消融。抗ASGM1介導的嗜堿性粒細胞的消耗與各種小鼠品系的NK細胞消耗有關，與NK1同種異型和MHC H2單體型（包括C57BL/6，BALB/c，C3H和小鼠A/J）無關。這些結果將嗜堿性粒細胞定義為以前未被認識到的抗ASGM1介導細胞消耗的靶標，并引起人們對嗜堿性粒細胞的關注，而不是NK細胞或除了NK細胞外對抗ASGM1處理的小鼠中觀察到的某些表型。

參考文獻：Nishikado H, Mukai K, Kawano Y, et al. NK cell-depletinganti-asialo GM1 antibody exhibits

　　　　　a lethal off-target effect on basophils invivo[J]. The Journal of Immunology,

　　　　　2011, 186(10): 5766-5771<全文>

◆研究腫瘤的免疫治療

　　腫瘤的發展過程包括血管新生，腫瘤尺寸增大和腫瘤轉移。使用CXCL14/BRAK (CXCL14) 轉基因小鼠研究過度表達的CXC趨化因子配體14 (CXCL14) 在上述生物學現象中的作用。與野生型小鼠相比，轉基因小鼠經AOM/DSS誘導的結腸血管新生的發病率顯著低很多。腫瘤細胞注射到這些小鼠后，腫瘤尺寸發生變化。與野生型的相比，轉基因小鼠肺中轉移小瘤的數目明顯少，腫瘤的尺寸也明顯變小。在注射腫瘤前后注射Anti Asialo GM1減少了CXCL14在腫瘤生長方面和腫瘤轉移的抑制效應，表明激活的NK細胞在CXCL14介導的抑制腫瘤生長和轉移期間起重要作用。CXCL14也表達在B16黑色素瘤細胞內表明NK細胞在腫瘤轉移方面的重要性。而且轉基因小鼠在注射腫瘤細胞后的存活率顯著增長。這些轉基因小鼠沒有明顯的不正常，預計腫瘤抑制/預防方面CXCL14起著重要作用。

參考文獻：Hata R et al.,Scientific Reports(2015) 5 : 9083 | DOI: 10.1038/srep09083 <全文>

動物模型	運用
腫瘤動物模型	與抗腫瘤藥物混合后注入腫瘤動物模型體內，研究抗腫瘤藥物是否通過激活NK細胞活性達到殺傷腫瘤細胞的作用。
肝病動物模型	與治療肝病的藥物混合后注入動物模型體內，研究藥物是否通過激活NK細胞活性達到治療肝病的效果。
器官移植動物模型	器官移植后會發生免疫排斥反應，機體內的免疫監視系統會清除：異己“的細胞和器官。可用于研究器官移植后免疫抑制劑的作用機理。
自身免疫疾病動物模型	研究治療自身免疫疾病藥物的作用機理。
干細胞動物模型	移植NK細胞活性，有利于干細胞動物模型的建立。

◆參考文獻

[1]	Nishikado H, Mukai K, Kawano Y, et al. NK cell-depletinganti-asialo GM1 antibody exhibits a lethal off-target effect on basophils invivo[J]. The Journal of Immunology, 2011, 186(10): 5766-5771.
[2]	Kasai, M., Iwamori, M., Nagai, Y., Okumura, K. and Tada, T.: Eur. J. Immunol., 10, 175 (1980)
[3]	Habu, S., Fukui, H., Shimamura, M., Kasai, M., Nagai, Y., Okumura, K. and Tamaoki, N.: Immunol., 127, 34 (1981)
[4]	Jinxing Xia et al., Clinica l Immunology.(2010) 134, 130–139.
[5]	Eirini Christaki et al., Journal of Immunology Research, Volume 2015 (2015), Article ID 532717, 10 pages.
[6]	Hata R et al.,Scientific Reports(2015) 5 : 9083 \| DOI: 10.1038/srep09083
[7]	Ivanova, D. L., Denton, S. L., & Gigley, J. (2019). Anti-Asialo GM1 treatment during secondary Toxoplasma gondii infection is lethal and depletes T cells. bioRxiv, 550608.
[8]	Sung, C. C., Horng, J. H., Siao, S. H., Chyuan, I. T., Tsai, H. F., Chen, P. J., & Hsu, P. N. (2020). Asialo GM1-positive liver-resident CD8 T cells that express CD44 and LFA-1 are essential for immune clearance of hepatitis B virus. Cellular & Molecular Immunology, 1-11.
[9]	Fujii, Y., Gerdol, M., Kawsar, S. M., Hasan, I., Spazzali, F., Yoshida, T., ... & Sugawara, S. (2019). A GM1b/asialo‐GM1 oligosaccharide‐binding R‐type lectin from purplish bifurcate mussels Mytilisepta virgata and its effect on MAP kinases. The FEBS journal.
[10]	Kikuchi, N., Ye, J., Hirakawa, J., & Kawashima, H. (2019). Forced expression of CXCL10 prevents liver metastasis of colon carcinoma cells by the recruitment of natural killer cells. Biological and Pharmaceutical Bulletin, 42(1), 57-65.
[11]	Jones, N. M., Yang, H., Zhang, Q., Morales-Tirado, V. M., & Grossniklaus, H. E. (2019). Natural killer cells and pigment epithelial-derived factor control the infiltrative and nodular growth of hepatic metastases in an Orthotopic murine model of ocular melanoma. BMC cancer, 19(1), 484.
[12]	Vandenhaute, J., Avau, A., Filtjens, J., Malengier-Devlies, B., Imbrechts, M., Van den Berghe, N., ...& Wouters, C. (2019). Regulatory Role for NK Cells in a Mouse Model of Systemic Juvenile Idiopathic Arthritis. The Journal of Immunology, 203(12), 3339-3348.
[13]	Junqueira-Kipnis, A. P., Trentini, M. M., Marques Neto, L. M., & Kipnis, A. (2020). Live Vaccines Have Different NK Cells and Neutrophils Requirements for the Development of a Protective Immune Response Against Tuberculosis. Frontiers in Immunology, 11, 741.
[14]	Murer, P., Kiefer, J. D., Plüss, L., Matasci, M., Blümich, S. L., Stringhini, M., & Neri, D. (2019). Targeted delivery of TNF potentiates the antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity of an anti-melanoma immunoglobulin. Journal of Investigative Dermatology, 139(6), 1339-1348.
[15]	Turaj, A. H., Dahal, L. N., Beers, S. A., Cragg, M. S., & Lim, S. H. (2017). TLR-3/9 Agonists Synergize with Anti-ErbB2 mAb. Cancer research, 77(12), 3376-3378.
[16]	Sorski, L., Melamed, R., Matzner, P., Lavon, H., Shaashua, L., Rosenne, E., & Ben-Eliyahu, S. (2016). Reducing liver metastases of colon cancer in the context of extensive and minor surgeries through β-adrenoceptors blockade and COX2 inhibition. Brain, behavior, and immunity, 58, 91-98.

◆其他文獻

本公司的抗Asialo-GM1抗體在以下為代表的各種文獻中均有應用案例。

1.	Hudson, W. A., Li, Q., Le, C., and Kersey, J. H., : Leukemia, 12, 2029 (1998).
2.	Murphy W. J., Durum S. K., Longo D. L., : PNAS, 89, 10, 4481 (1992).
3.	Bentzmann S., Roger P., Dupuit F., Bajolet-Laudinat O., Fuchey C., Plotkowski C. M., Puchelle E. : Infection and immunity, 64, 5, 1582 (1996).
4.	Nishikado H., Mukai K., Kawano Y., Minegishi Y., Karasuyama H. : J. Immunol., 186, 10, 5766(2011).
5.	Victorino, F., Sojka, K. D., Brodsky, S. K. McNamee, N. E., Masterson, C. J., Homann, D., Yokoyama, M. W., Eltzschig, K. H., Clambey, T. E., : J. Immunol., 195, 10, 4973(2015).

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