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模基生物(ABW)基質(zhì)膠常見問題及解決方案

A、關(guān)于基質(zhì)膠應用的常見問題


1.ABW?Matrigengel高濃度基底膜基質(zhì)用于哪些實驗?
ABW?Matrigengel高濃度基底膜基質(zhì)可進行體內(nèi)應用研究,如高濃度蛋白可促進腫瘤生長。高濃度蛋白同時可使得
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)被注射入小鼠皮下后保持完整,有利于注射的腫瘤細胞和/或血管生成因子保持原位,便
于用于原位分析和/或以后的切除。


2.如何將ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)用于3D培養(yǎng)?怎樣制作3D膠?需要將細胞嵌入到
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中嗎?
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可進行體外應用研究,如制備厚層包被用于3D細胞培養(yǎng)。細胞可以內(nèi)嵌在
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中生長或者直接接種在ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)表面(覆蓋法)生長。


3.什么情況下,需要使用無酚紅ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)?
對于涉及顏色檢測的實驗,推薦使用無酚紅ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì),如使用熒光染料或Drabkins法計數(shù)內(nèi)皮
細胞成管實驗。對于子宮內(nèi)膜細胞培養(yǎng),也需使用無酚紅ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)。
此外,酚紅和非甾體雌激素結(jié)構(gòu)類似,有類雌激素效應。在實驗動物體內(nèi)具有干擾內(nèi)分泌和荷爾蒙代謝的能力。


4.如何從ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中收獲細胞?
推薦使用中性蛋白酶消化或細胞回收方案來收獲培養(yǎng)在ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中的細胞。
(1)中性蛋白酶消化
中性蛋白酶相比胰酶、膠原酶或其他蛋白水解酶能夠更溫和有效地獲得單細胞懸液,不會損傷細胞或細胞表面蛋白
。對于需要繼續(xù)接種培養(yǎng)或進行檢測的細胞,使用中性蛋白酶不會產(chǎn)生損傷。此外中性蛋白酶也可以用于組織分離。
(2)細胞回收
對于代謝研究和需抽提細胞中RNA時,建議在4℃使用細胞回收解決方案進行非酶消化的細胞收獲。因為
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中含有痕量的RNA,進行RNA分析時,應設置一個ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)(不接
種細胞)的對照組。
(3)其它
降低溫度至4℃-6℃使ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)解聚,以適當轉(zhuǎn)速離心破壞ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)結(jié)構(gòu)
,獲得單細胞懸液。此方法僅適合少部分應用場景。


5.哪些情況應該選用薄膠,哪些情況應該選用厚膠,3D細胞培養(yǎng)有哪些應用?
薄膠主要用于輔助細胞貼壁,有利于細胞增殖;如原代細胞培養(yǎng),需要一層薄薄的蛋白層輔助,就可以選用薄膠。
厚膠主要用于3D細胞培養(yǎng);如大鼠主動脈組織分化為毛細血管樣結(jié)構(gòu)(RingAssay),以及進行細胞侵襲實驗等。
3D細胞培養(yǎng)實驗,可以建立起生理上的細胞-細胞與細胞-細胞外基質(zhì)相互作用,主要是用于研究細胞與細胞間的相
互作用以及更復雜的結(jié)構(gòu)作用,如生物組織等。


6.進行內(nèi)皮管形成實驗,應該選用多大濃度的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)呢?
進行該實驗,ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)最低濃度應不低于10mg/mL。


7.做細胞侵襲實驗,需要使用多少ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)進行包被?
進行細胞侵襲實驗,以包被24孔板為例,推薦使用每孔0.1mL(濃度200-300μg/mL)的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)
(貨號為082704)。


8.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)的最低成膠濃度是多少?
不同的實驗需要不同濃度的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì),用戶應該根據(jù)具體的實驗需求確定。
ABW
?Matrigengel基底膜基質(zhì)最低成膠濃度為3mg/mL。稀釋時不能簡單進行體積倍比稀釋,不同批次間的
ABW
?Matrigengel基底膜基質(zhì)濃度有差異,應該根據(jù)最終工作濃度(mg/mL)算出需要加入的稀釋液體(如PBS或無血
清培養(yǎng)基)的量。用于體內(nèi)研究的ABW
?Matrigengel基底膜基質(zhì),為了避免成膠不完全,最終工作濃度不應低于
4mg/mL。


9.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)膠塊在體內(nèi)可以維持多長時間?
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)膠塊可以在體內(nèi)維持至少一周的時間。


10.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可以誘導ES/iPS細胞分化嗎?
可以的,已經(jīng)有相關(guān)論文報道ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可以用于ES/iPS細胞的分化研究。


B、關(guān)于基質(zhì)膠操作的常見問題


1.使用ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)時,需要將移液管、吸頭和離心管預冷嗎?
是的。因為ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)在高于10℃的條件下即會開始成膠,我們推薦操作基底膜基質(zhì)時使用預冷
的移液管、吸頭和離心管。


2.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)會快速聚合嗎?
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)在22℃至35℃時會快速聚合成膠。


3.使用ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)包被過的培養(yǎng)皿可以儲存多長時間呢?
包被過的培養(yǎng)皿最好當天使用,具體情況取決于實驗目的。需要保存的情況下,可在37°C培養(yǎng)箱中最多存放7天。保
存時ABW
?Matrigengel基底膜基質(zhì)表面需要使用無血清培養(yǎng)基均勻覆蓋,保持濕潤。


4.怎樣稀釋ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)?
使用冰上預冷的無血清培養(yǎng)基或者pH7.4的PBS對ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)進行適當比例的稀釋。


5.應該如何對ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)進行移液操作?
推薦使用預冷的移液器或者注射器操作,移液管、槍頭同樣需要預冷。吸液時不要觸及瓶子底部;分液時切忌過快、
用力過猛。如果使用移液管分液5mL時,應該吸取6mL,分液到移液管內(nèi)仍有1mL時即停止;如果使用自動移液器,按壓
到第二檔位吸液,然后按壓到第一檔位進行分液。


6.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可以反復凍融嗎?
建議用戶第一次融化后按照單次用量進行分裝,保存。


7.未稀釋的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中出現(xiàn)的沉淀應該怎么樣處理?
4℃下低速離心,去除沉淀物。


8.未使用完的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)應該怎樣保存?
與細胞培養(yǎng)基或緩沖液混合過但未使用完的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì),不建議保留再用。


9.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可以儲存在-70℃嗎?
可以。 ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可以儲存在-70℃。建議客戶將整瓶的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)進行分裝,
儲存于聚丙烯或其他可以耐受超低溫條件材質(zhì)的小管中,方便保存和使用。


10.為什么細胞沒有貼壁,ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)也脫落了?
首先,需要檢查細胞的接種濃度是否過高, ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)的用量應等同于細胞培養(yǎng)體系中培養(yǎng)基的用
量。其次,如果ABW
?Matrigengel基底膜基質(zhì)被稀釋到過低的濃度,形成的膠體容易從組織培養(yǎng)器皿表面分離。


11.使用ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)培養(yǎng)的細胞,如果需要進行切片或者免疫組織化學及免疫熒
光檢驗,該怎樣固定呢?如何避免解聚?
可以使用2%濃度的多聚甲醛進行固定。為避免固定后出現(xiàn)解聚的情況,可以加入1%濃度的戊二醛。戊二醛作為固定
劑,常用于電鏡觀察。如果用戶需要進行免疫熒光檢驗,加入戊二醛后,會出現(xiàn)明顯的背景熒光。為了解決這一問題,我
們建議用戶在固定之后,使用NaBH4使熒光淬滅。NaBH4極易起泡,進行該步驟時,必須在水平操作臺上小心操作,避
免晃動,盡量減少氣泡的形成。另外,用戶也可以嘗試使用較低濃度的戊二醛進行固定,如0.1%到0.5%,濃度越低,背
景熒光信號越少。


C、關(guān)于基質(zhì)膠成分的常見問題


1.為什么我的ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)很粘稠?
基質(zhì)膠的蛋白濃度越高,膠體越粘稠。如果濃度高于13.0mg/mL,基質(zhì)膠會顯得非常厚重。
ABW
?Matrigengel基底膜基質(zhì)在未稀釋前都會比較粘稠。粘稠的高濃度ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可直接使用
,如用于培養(yǎng)腫瘤細胞和/或血管生成因子,注射于小鼠體內(nèi)后,使細胞保持原位,便于原位分析和/或以后的切除等;
或者稀釋后,按照標準濃度的ABW
?Matrigengel基底膜基質(zhì)使用方法使用,具體稀釋濃度根據(jù)實驗需求確定。
除因為產(chǎn)品本身濃度高而粘稠外,基質(zhì)膠的狀態(tài)還與運輸過程中溫度的變化和儲藏條件有關(guān)。整個運輸過程中必須
使用干冰冷藏。如果儲藏ABW
?Matrigengel基底膜基質(zhì)的冰箱帶有自動除霜功能,冰箱除霜過程中升溫,可能使基質(zhì)膠
成膠。所以,切忌將ABW
?Matrigengel基底膜基質(zhì)儲藏于此類冰箱中。為保證ABW?Matrigengel底膜基質(zhì)的使用效果
,凍融次數(shù)應該盡可能減少。拿到新的ABW
?Matrigengel基底膜基質(zhì)后,請按照單次用量進行分裝。每次融化操作,
ABW
?Matrigengel基底膜基質(zhì)都應置于冰上。如果ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)在成膠狀態(tài)被凍住,再次融化時將不
能成恢復液體狀態(tài)。


2.為什么ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)在37°C成膠,而在4°C時卻呈液體狀態(tài)?
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)是一種從小鼠骨肉瘤中提取的重組基底膜,新鮮提取的原料中主要包括以下成分:層
粘連蛋白,IV型膠原,巢蛋白,基底膜聚糖、表皮生長因子、類胰島素生長因子及其他生長因子。這些蛋白構(gòu)成了
ABW
?Matrigengel基底膜基質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)。
在22℃-37℃溫度條件下,大分子間的共價鍵可以結(jié)合,促使ABW
?Matrigengel基底膜基質(zhì)形成凝膠。而在低溫條
件(如4℃)下,由于沒有足夠的能量促使共價鍵結(jié)合,所以ABW
?Matrigengel基底膜基質(zhì)呈現(xiàn)液體狀態(tài)。


3.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中含有DNA和/或RNA嗎?
是的。ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)沒有經(jīng)過DNA酶或RNA酶消化處理,可能會含有痕量的DNA、RNA。


4.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中有血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和金屬蛋白酶(MMPs)嗎?
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中含有微量的血管內(nèi)皮生長因子(VEGF),也可能含有小鼠腫瘤細胞來源的痕量金屬
蛋白酶(MMPs)。


5.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中有LDEV嗎?
沒有的。ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)經(jīng)免疫方法及PCR方法檢測,并不含有乳酸脫氫酶增高病毒(LDEV)或者乳
酸脫氫酶增生病毒(LDHV)。此外,我們還針對小鼠群體及腫瘤來源篩查了其他種類的病毒,詳細信息請參見產(chǎn)品分
析證明書COA。


6.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中有尿素嗎?
沒有的。在ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)生產(chǎn)過程中使用了尿素,后續(xù)流程中經(jīng)過透析方法已經(jīng)去除了。


7.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)使用的什么緩沖液?
低葡聚糖DMEM(1g/L),其中包含50μg/mL慶大霉素。


8.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中含有纖維連接蛋白(Fibronectin)嗎?
是的,通過使用WesternBlot檢驗,我們在ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中發(fā)現(xiàn)了微量的纖維連接蛋白
(Fibronectin)。


9.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中含有玻連蛋白(Vitronectin)嗎?
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)是從小鼠腫瘤組織提取的,某些腫瘤組織中可能含有微量的血液,因此
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中可能會有痕量的玻連蛋白(vitronectin)。


10.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中還有什么別的物質(zhì)?
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)中還可能含有濃度小于0.02%的三氯甲烷,以及腫瘤細胞產(chǎn)生的其他未知蛋白或分子。


11.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)的生產(chǎn)過程會引起層粘連蛋白變性嗎?
不會引起層粘連蛋白變性。


12.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)的折射率是多少?
20℃條件下, ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)的折射率是1.3406到1.3407,相對折射率為1.0056(同等條件下,水的
折射率為1.333)。


13.ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)會有自發(fā)熒光嗎?
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)是一種蛋白混合物,經(jīng)過透析處理后溶解在DMEM培養(yǎng)基中。為防止微生物污染,培
養(yǎng)基中添加了慶大霉素。所以
ABW?Matrigengel基底膜基質(zhì)可能引發(fā)熒光的組分包括其中的蛋白質(zhì)成分,維生素成分以
及慶大霉素(氨基糖苷類抗生素)。如果需要使用熒光檢測細胞生長狀態(tài),建議使用者建立對照實驗,在所需要的波長條
件下進行對比,以便排除背景熒光。


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